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實(shí)驗(yàn)原理：
芽孢壁厚，透性低，著色、脫色困難，利用著色力強(qiáng)的染色劑在加熱條件下染色時(shí)，染料同時(shí)進(jìn)入菌體和芽孢。進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進(jìn)入芽孢的染料則難以透出，若再用復(fù)染液染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染液的顏色，即菌體和芽孢分別被染成紅色和綠色來(lái)區(qū)分。
操作步驟：
1. 取一個(gè)載玻片，在其中央滴一滴去離子水，用接種環(huán)蘸取少量菌體于去離子水中，涂抹均勻，待干燥后，在火焰上過(guò)3次以固定；
2. 滴加3-4滴A液于已經(jīng)固定的涂片上；
3. 用鑷子夾住載玻片在火焰上持續(xù)加熱6-8s（可續(xù)加染液以防其蒸干）；
4. 加熱完畢待玻片冷卻后，傾去染液，水洗至不再褪色為止；
5. 用B液復(fù)染1min，水洗至流出液無(wú)色。待玻片干燥后，轉(zhuǎn)移至顯微鏡油鏡下觀察。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
枯草芽孢桿菌的芽孢呈綠色，菌體呈紅色。
注意事項(xiàng)：
1. 只有在加熱條件下芽孢滲透性發(fā)生變化，才能將其染色；
2. 第3步，持續(xù)加熱6-8s要使染液冒蒸汽但不能沸騰，并且不能蒸干。
