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實驗原理:
馬尿酸鈉水解實驗通常用于空腸彎曲菌的鑒定,也可用于軍團(tuán)菌、乳酸菌、B族鏈球菌的鑒定。
這些細(xì)菌具有馬尿酸鈉水解酶,可將馬尿酸鈉水解為甘氨酸和苯甲酸,甘氨酸可與茚三酮反應(yīng)生成紫色化合物。
操作步驟:
1. 取出馬尿酸鈉生化管,置于安瓿瓶試管架中,做好標(biāo)記,包括菌株名稱、菌株編號,在易折點處(即瓶頸上方藍(lán)點)掰開安瓿瓶,備用。
2. 用接種環(huán)挑取空腸彎曲菌的大量菌苔接種至生化管,混合均勻,相同方法接種結(jié)腸彎曲菌,并設(shè)置一支空白對照,放置于36℃水浴2h,也可放置于36℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h。
3. 下面配制3.5%(水合)茚三酮溶液,用移液槍分別吸取5mL丙酮和丁醇,至棕色瓶中混合均勻,稱取0.35g(水合)茚三酮溶解于丙酮/丁醇混合溶液中,備用。
4. 培養(yǎng)結(jié)束后,取出生化管,用移液槍吸取0.2mL茚三酮溶液,沿著管壁緩慢加入管中,不可振蕩,再置于36℃水浴10min或培養(yǎng)箱中溫育10min,觀察試驗結(jié)果。
結(jié)果判斷:
溫育結(jié)束后,取出生化管,觀察試驗結(jié)果,接種空腸彎曲菌的生化管變?yōu)樯钭仙瑸殛栃越Y(jié)果;接種結(jié)腸彎曲菌的生化管為黃色,與空白對照一致,為陰性結(jié)果。
注意事項:
1. 此試驗需用新鮮的菌,接種時需挑取大量菌體(接種環(huán)一滿環(huán)),若接種量太少可能會出現(xiàn)假陰性;
2. 掰開安瓿瓶時最好包裹紗布,以免劃傷手指
3.%馬尿酸鈉生化鑒定管應(yīng)放置與-20℃保存;
4. 茚三酮溶液最好現(xiàn)配現(xiàn)用,如需保存,可在避光冷藏條件下保存不超過7d。