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檢驗原理：
通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此，能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
操作步驟：
1. 涂片經(jīng)火焰固定，加（結(jié)晶紫溶液）溶液A染1分鐘，用清水沖去染液。
2.加（碘液）溶液B染1分鐘，水洗。
3.加（95%乙醇）溶液C，不時搖動玻片約10-30秒，至無紫色脫落為止，水洗。
4.加（沙黃復(fù)染液）溶液D，染1分鐘，水洗。
5.干后油鏡鏡檢。陽性菌呈紫色、陰性菌呈淡紅色。
